C3 - Les anticorps
Les symptômes liés à la grippe saisonnière sont des symptômes que l’on retrouve pour d’autres infections virales. Les données cliniques ne suffisent donc pas toujours à diagnostiquer une grippe.
Objectif : On cherche à savoir si un patient est effectivement atteint de la grippe.
A – Le test de dépistage de la grippe
Dans les faits, les tests de dépistage de la grippe utilisés en routine par les médecins (en particulier les généralistes) sont des tests d’immuno-chromatographie dont le principe est présenté ci-dessous : à partir de prélèvements naso-pharyngés, ces tests permettent de mettre en évidence la présence éventuelle d’antigènes spécifiques.
1) Expliquez le principe d’un test d’immuno-chromatographie.
B – Le test d’immunodiffusion ou test d’Ouchterlony
Livre p 397 doc. 2
Fiche technique Ouchterlony
2) Après lecture du protocole fourni, choisissez la disposition des produits dans la boîte de Petri et justifiez ce choix.
3) Réalisez le protocole en utilisant les indications de la fiche technique.
4) Représentez les résultats de la boîte fournie en réalisant un schéma.
5) Schématisez les associations moléculaires que révèle un arc de précipitation (complexe immun). Respectez les modèles proposés dans la fiche technique.
6) Répondez à la problématique : Monsieur X est-il atteint de la grippe ?
C – La structure d’un anticorps
Livre p 397 doc. 3
Logiciel Libmol (internet) : Modèle théorique d’un anticorps complet
Les protéines γ-globulines, aussi appelées immunoglobulines pour leur rôle dans la réponse immunitaire adaptative, sont constituées de quatre chaînes protéiques liées deux à deux :
- deux chaînes légères (notées L) sont constituées chacune d'environ 220 acides aminés ;
- deux chaînes lourdes (notées H) sont constituées chacune d'environ 440 acides aminés.
L'association d'une chaîne lourde avec une chaîne légère ménage à son extrémité un site pouvant fixer spécifiquement un antigène. Ainsi, chaque immunoglobuline peut lier deux antigènes identiques. La partie de l'anticorps où les deux chaînes lourdes sont associées est appelée la région constante, celle qui peut varier d’un anticorps à l’autres, la région variable.
7) Réalisez un schéma légendé de la structure théorique d’un anticorps complet à partir d’une capture d’écran (rubans, chaînes, ponts disulfure).
D – La spécificité des anticorps
Logiciel Libmol (internet) : Anticorps anti-virus de la grippe (1 bras composé d’une chaîne légère A et d’une chaîne lourde B lié à l’antigène C de la grippe).
Protocole : Mettre en évidence le site de fixation de l’antigène sur l’anticorps.
1 – Représenter les chaînes en rubans.
2 – Sélectionner les acides aminés des sites de fixation de l’antigène sur l’anticorps :
- Chaîne A : Asn96
- Chaîne B : Ile30, Ala53, Gly54, Asn56, Tyr102, Asp103, Phe105 et Tyr107
3 – Représenter en sphère les acides aminés sélectionnés.
8) Réalisez une capture d’écran légendée de l’interaction de l’antigène de la grippe avec l’anticorps anti-grippe.
9) Expliquez comment s’effectue la reconnaissance spécifique d’un antigène par un anticorps (et donc la formation des complexes immuns).
E – L’origine de la diversité des anticorps
Livre p 400 et 401.
Estimation de la diversité des anticorps produits pour un lymphocyte B.
10) Expliquez comment les anticorps peuvent être aussi variés avec seulement 21000 gènes dans le génome humain.
11) Calculez le nombre de combinaisons d’ADN recombiné différentes qu’il est possible de générer dans un lymphocyte B.
Fiche technique : Test d'OUCHTERLONY
Protocole expérimental :
1 – Poser le gabarit de perçage sous la boite de gélose (couvercle vers le haut).
2 – Ouvrir la boite et percer les 4 trous à l'emporte-pièce en suivant le modèle.
Le morceau de gélose prélevé par l'emporte-pièce est enlevé soit en restant dans le tube soit en se servant du tube comme d'une "pelle" pour pousser le disque hors du trou vers les côtés de la boite.
3 – Refermer la boite, la retourner, et numéroter de 1 à 4 les puits en prévision du dépôt des solutions.
|
|
Couleur du bouchon du tube |
N° |
Solution contenue dans le tube |
|
Anticorps |
Rouge |
1 |
Anticorps anti-grippe |
|
Antigène |
Bleu |
2 |
Sérum de patient sain |
|
Vert |
3 |
Sérum de patient malade (grippe) |
|
|
Jaune |
4 |
Sérum de Monsieur X |
4 – Déposer chaque solution dans chacun des puits (à ras bord).
Déposer une solution différente par puits.
Ne pas "contaminer" les solutions en mélangeant les pipettes !
5 – Laisser les boites à température ambiante, avec le couvercle.
6 – Au bout de 45 minutes, un arc blanc apparaît entre certains puits. Pour bien les observer, regarder au travers de la boite sur un fond noir avec une illumination oblique.
Modèles permettant la réalisation du schéma explicatif à l'échelle moléculaire
